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产毒素性多杀性巴氏杆菌感染抗体间接ELISA方法的建立与优化

2019-08-11

产毒素性多杀性巴氏杆菌感染抗体间接ELISA方法的建立与优化

摘要:为确定产毒素性多杀性巴氏杆菌在猪群的感染情况和对猪群进行性萎缩性鼻炎发病情况开展调查,本以大肠杆菌表达后纯化的重组产毒素性多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素PMT蛋白为包被抗原,通过条件优化建立优化了检测产毒素性多杀性巴氏杆菌感染抗体的间接ELISA方法。

经试验得出,2g/ml为最佳抗原包被浓度,37℃2h是最佳包被时间,37℃3h是最佳封闭时间,待检血清最佳稀释度为1:100,血清最佳作用时间为37℃1h,酶标抗体SPA最佳稀释度为1:10000,作用时间为,底物最佳显色时间为37℃5min。 30份PAR阴性血清间接ELISA检测结果的统计学分析显示:本方法的判定标准是当时判为阴性,时判为阴性,<OD450<时判为可疑。

特异性和可重复性实验证明建立的该检测方法特异性强,可重复性好,完全可以用于临床样品的检测。

28597关键词:猪进行性萎缩性鼻炎;产毒素性多杀性巴氏杆菌;PMT蛋白;间接ELISADevelopmentandOptimizationofanIndirectELISAforAntibodyDetectionagainstToxigenicPasteurellaMultocidaAbstract:ToprovideaserologicalmethodfordetectingantibodiesagainsttoxigenicPasteurellaMultocida,a/mlwasthebestconcerntrationofthecoatingantigenand2hat37Cwasthebesrtimeofthecoatingantigen;3hat37Cwasthebesttimeofblockingbuffers;serasamplesdilutionwrellaMultocidanegativeserasamples,;ificandrepeated,whichcanbeusedtodiagnoseclinicalsamples.源`自*六)维[论*文网:progressiveatrophicrhinitis;toxigenicPasteurellamultocida;PMTprotein;indirectELISA目录摘要1关键词1Abstract1Keywords1引言11与方法材料抗原蛋白的制备间接ELISA条件优化32结果与分析蛋白的纯化间接ELISA方法的建立与优化间接ELISA临界值的确定间接ELISA的重复性试验间接ELISA的特异性试验临床血清样品的检测93讨论9致谢10参考10产毒素性多杀性巴氏杆菌感染抗体间接ELISA方法的建立与优化多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida,Pm)可以导致禽霍乱、牛羊败血症、猪肺疫等危害严重的畜禽传染病[1]。 其中产毒素性多杀性巴氏杆菌(toxigenicPasteurellamultocida,T+Pm)在临床生产中可以导致进行性萎缩性鼻炎(progressiveatrophicrhinitis,PAR)。

该菌分泌的一种由toxA基因编码的皮肤坏死毒素(Pasteurellamultocidatoxin,PMT)引起猪的主要临床症状特征是:猪鼻炎,猪面部变形,典型的鼻甲骨萎缩变化,营养代谢障碍,发育迟缓,猪机体免疫受损导致其易感其他病原微,交叉感染情况严重[2-4]。

该毒素分子量大小约146kDa。 PAR是对现代集约化养猪场生产危害最大的传染性疾病之一,被OIE列为B类动物传染病[5]。

1830年人们第一次在德国发现PAR,现在世界各地都有其分布。

PAR每年导致的损失惨重,可达数千万元[6]。

该病可使肉猪饲料转化率降低,发育不良,增重减慢,出栏时间推迟,并使感染猪机体免疫力下降,更容易感染猪繁殖与呼吸综合征病毒、支原体、猪流感病毒和其他病原体。

因此,要提高猪群生产性能就必须对该病进行有效的控制[7]。 此时就必须使用实验室诊断技术来确认。 现阶段有许多PAR的实验室诊断方法,整体研究方向趋于特异性强、敏感度高、操作简便、费用低廉。

产毒素性多杀性巴氏杆菌感染抗体间接ELISA方法的建立与优化:。